00;BP3的相对分子质量为2。
Rh、Re内标元素在样液中的浓度为10gL-1。HNO3、HCl(UPS级,苏州晶瑞化学股份有限公司),HClO4(优级纯国药集团化学试剂有限公司),HF(BV-Ⅲ级,北京化学试剂研究所),实验用水为MiLLi-Q去离子水。
辅助气流量:1.2 Lmin-1;雾化器:同心雾化器。湿法消解适用检测元素的范围宽,方法成熟,应用范围广,缺点是耗时长,用酸量大,升温高,实验过程复杂,易导致挥发损失、转移损失和样品污染。2.3.3标准物质分析仪器经调谐,优化各项参数后,对有证标准物质土壤样品(GBW07456)进行测定,验证方法的准确性。该方法简便快捷、灵敏度高、重现性好,是分析土壤重金属污染的可靠、高效方法。为了降低稻米中镉污染风险,地方政府耗费大量的财力在水稻收割前后开展稻米和土壤中重金属镉的风险评估。
待坩埚上黑色有机物消失后,开盖驱赶白烟并蒸至内容物呈黏稠状。3小结与讨论建立的土壤重金属ICP-Ms分析方法的简易消解过程,与湿法消解对比,在满足分析要求的基础上,土壤简易消解法省时省力省成本,可更好降低对环境的污染结果表明,人重组ACE2可显著降低细胞和多种人体器官模型的病毒感染,而鼠源重组ACE2则没有此效果。
液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)在保留色谱技术高效分离优势的同时,通过MS获得待测组分丰富的结构信息,在药物代谢、复杂基质单一成分鉴定、代谢组学研究等方面凸显优势。2 液相色谱高效液相色谱(HPLC)具有高效、快速、灵敏度高、重复性好等特点,是化合物纯度鉴定和生物大分子分析的通用分析方法。Zost等将超速离心用于S蛋白假型慢病毒的分离,来测定两种单克隆抗体的中和能力,结果显示假病毒比野生型病毒具有更敏感的中和表型,证明在单克隆抗体效果测定中使用活病毒的必要性。7 结论新型冠状病毒研究已取得一定进展,分离技术在其中发挥着重要作用。
Zhao等在磁性纳米颗粒上涂覆了一层聚(氨基酯)-羧基,利用核酸与羧基之间强相互作用提取SARS-CoV-2的RNA1.2 病毒感染机制研究Yan等通过链霉亲和素突变体(Strep-Tactin)琼脂糖凝胶和SEC纯化了亲水性多肽标签(FLAG-tag)标记中性氨基酸转运蛋白(B0AT1)和链霉亲和素结合肽标签(Strep-Tag)标记ACE2,研究在有无RBD的情况下,ACE2与B0AT1复合物的晶体结构差异,推动病毒感染的分子基础研究。
Yuan研究组将Protein G亲和柱用于患者体内SARS-CoV特异性人类单克隆抗体(CR3022)的纯化,研究发现CR3022可有效结合SARS-CoV-2的RBD蛋白,是一种潜在的抗病毒药物。声明:本文所用图片、文字来源《色谱》,版权归原作者所有。Hillen等利用组氨酸标记(HisTrap)亲和色谱柱纯化冠状病毒复制和转录的主要RNA聚合酶(Nsp 12)及其辅助因子Nsp 7和Nsp 8,分析这些蛋白质与RNA依赖性聚合酶的结构,应用于病毒RNA复制研究。相关链接:蛋白酶,色谱,病毒。
表1统计了上述AC和SEC纯化的多种新型冠状病毒相关蛋白质,并列举了纯化使用的蛋白标签。1.3 新型冠状病毒的药物筛选及疫苗设计Gao等用Ni-NTA亲和色谱柱纯化了Nsp 12、Nsp 7和Nsp 8,解析了该聚合酶与抗病毒药物瑞德西韦(remdesivir)的结合方式。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系删除。Ju等使用Protein A亲和柱对SARS-CoV-2感染者B细胞中RBD特异性单克隆抗体进行纯化,从206种纯化的单克隆抗体中发现抗SARS-CoV-2中和活性抗体,且该抗体基本不结合SARS-CoV和MERS-CoV。
Riva等利用Ni-NTA亲和色谱柱对SARS-CoV-2的木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)和主蛋白酶(Mpro)进行纯化,从约 12 000 个临床阶段的小分子药物中筛选出13种具有治疗效果的小分子抑制剂声明:本文所用图片、文字来源《色谱》,版权归原作者所有。
Yuan研究组将Protein G亲和柱用于患者体内SARS-CoV特异性人类单克隆抗体(CR3022)的纯化,研究发现CR3022可有效结合SARS-CoV-2的RBD蛋白,是一种潜在的抗病毒药物。1.3 新型冠状病毒的药物筛选及疫苗设计Gao等用Ni-NTA亲和色谱柱纯化了Nsp 12、Nsp 7和Nsp 8,解析了该聚合酶与抗病毒药物瑞德西韦(remdesivir)的结合方式。
如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系删除。1.2 病毒感染机制研究Yan等通过链霉亲和素突变体(Strep-Tactin)琼脂糖凝胶和SEC纯化了亲水性多肽标签(FLAG-tag)标记中性氨基酸转运蛋白(B0AT1)和链霉亲和素结合肽标签(Strep-Tag)标记ACE2,研究在有无RBD的情况下,ACE2与B0AT1复合物的晶体结构差异,推动病毒感染的分子基础研究。相关链接:蛋白酶,色谱,病毒。表1统计了上述AC和SEC纯化的多种新型冠状病毒相关蛋白质,并列举了纯化使用的蛋白标签。Hillen等利用组氨酸标记(HisTrap)亲和色谱柱纯化冠状病毒复制和转录的主要RNA聚合酶(Nsp 12)及其辅助因子Nsp 7和Nsp 8,分析这些蛋白质与RNA依赖性聚合酶的结构,应用于病毒RNA复制研究。Riva等利用Ni-NTA亲和色谱柱对SARS-CoV-2的木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)和主蛋白酶(Mpro)进行纯化,从约 12 000 个临床阶段的小分子药物中筛选出13种具有治疗效果的小分子抑制剂。
Ju等使用Protein A亲和柱对SARS-CoV-2感染者B细胞中RBD特异性单克隆抗体进行纯化,从206种纯化的单克隆抗体中发现抗SARS-CoV-2中和活性抗体,且该抗体基本不结合SARS-CoV和MERS-CoV综述统计了亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化的病毒相关蛋白,并介绍了其在新型冠状病毒传播、感染机制以及药物筛选中的应用。
2020年1月爆发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在短时间内迅速蔓延全球,给世界公共卫生体系带来了前所未有的挑战。而以离心为代表的传统分离技术,是新型冠状病毒研究的基础技术手段,方法简单快捷,可初步分离病毒、细菌等大颗粒物质。
简要介绍了电泳在聚合酶链式反应(PCR)产物分析中的应用。相关链接:色谱,病毒,细胞。
目前,疫情已持续1年多,全球累计确诊病例超1.18亿例,且仍呈增加趋势。该文综述了2020年度新型冠状病毒研究和防疫检测中分离技术的应用情况,分析了分离技术在新型冠状病毒检测中发挥的作用,旨在为从事分离研究的科研工作者提供一些参考。SEC是根据相对分子质量差异对待测物中各组分进行分离,优势在于分辨率高,操作简单,但对于样品纯度要求很高,因此常用于亲和色谱后蛋白质的进一步纯化。1.1 新型冠状病毒传播研究Shang等使用镍离子金属螯合亲和色谱(Ni-NTA)对多聚组氨酸标签(His6-tag)标记的SARS-CoV-2和SARS-CoV的RBD以及ACE2胞外域分离纯化,使用Protein A亲和色谱纯化重组人APOM蛋白(Fc-tag)标记的ACE2,随后用SEC对蛋白质进一步纯化。
其中,国际顶级学术期刊Nature, Science和Cell分别发表新型冠状病毒相关论文62、58和43篇,论文中应用的分离技术主要有亲和色谱(AC)和尺寸排阻色谱(SEC)、液相色谱、磁珠分离和离心,研究内容涉及新型冠状病毒的传播、溯源、治疗药物、疫苗研发、临床防治和疫情防控等方面。该文以SARS-CoV-2或COVID-19为关键词在ISI Web of Science中进行主题检索,归纳了2020年度新型冠状病毒相关的研究论文,简要介绍主要的研究方向,并对国际顶级学术期刊Nature,Science,Cell的论文发表情况进行了统计。
以同样方法分离纯化SARS-CoV-2、SARS-CoV和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的RBD以及ACE2胞外域后,Shang等对比分析ACE2与3种病毒RBD的结合差异,为病毒干扰策略研究提供参考。介绍了液相色谱对病毒候选药物评估以及复杂基质中单一成分的鉴定。
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的爆发给世界公共卫生安全带来前所未有的挑战。分析化学类专业期刊发表相关论文有限,代表性期刊Analytical Chemistry在2020年全年仅发表14篇新型冠状病毒研究论文,其中2篇报道采用微纳分离技术对病毒进行高灵敏检测。
分离技术作为生命科学、医学、药学领域的关键技术,操作简单,分离效率高,选择性强,在新型冠状病毒的分离、检测、诊疗及防疫中起到不可替代的作用。为了尽快控制疫情,全球科研和临床医护人员联手攻关,从病毒的传播途径、感染致病机制、快速检测诊断、疫苗开发等多方面开展研究,在短时间内取得了一系列突破进展。本文以COVID-19或SARA-CoV-2为关键词,在ISI Web of Science数据库中进行主题检索,截至2020年12月31日为止,相关期刊论文已达 26 160 篇,研究方向包括普通内科学、公共环境卫生、传染病学、药理学、分子生物学、化学等(见图1)。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系删除。
在当前新型冠状病毒研究中,AC与SEC常被用于纯化病毒表面S蛋白、ACE2、S蛋白受体结合域(RBD)等。其中,AC是通过生物分子与功能配基的特异性作用对目标蛋白质进行分离纯化,是实验室中生物大分子分离纯化最具特异性和高效性的技术,但配基昂贵且偶联技术复杂,限制了其应用。
介绍了微纳分离结合其他技术以实现病毒蛋白的高灵敏检测。其中,以色谱为代表的现代分离技术,在实现病毒微量蛋白质纯化的同时能保持蛋白质活性和分子结构完整,适用于发病机制、疫苗研发、临床治疗等研究。
声明:本文所用图片、文字来源《色谱》,版权归原作者所有。通过检索影响因子较高的期刊,综述了新型冠状病毒研究中主要应用的分离技术,并从亲和色谱和尺寸排阻色谱、液相色谱、磁珠分离、离心、微纳分离以及电泳6个方面进行说明。
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